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circRNA實時定量PCR檢測是高通量篩選后驗證的必選實驗，基于qPCR檢測技術(shù)的circRNA表達與差異分析是對測序、芯片結(jié)果的有效補充和驗證。根據(jù)circRNA的閉合環(huán)形結(jié)構(gòu)，針對其接頭序列設計Divergent primers，能有效與線性RNA區(qū)分開來。引物經(jīng)過多方面嚴格的驗證，包括qPCR的擴增曲線、溶解曲線、產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠驗證、產(chǎn)物的測序驗證，可有效保障檢測數(shù)據(jù)的準確性和可靠性，可檢測細胞、組織、血液和外泌體等多種樣本中circRNA差異表達情況。
圖1 circRNA qPCR引物設計原理
圖2 circRNA qPCR引物擴增曲線、溶解曲線
圖3 circRNA qPCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳
圖4 circRNA qPCR產(chǎn)物測序結(jié)果
晶萊生物服務流程
晶萊生物實驗服務項目
| 動物實驗 | 細胞生物學 | 病理實驗 |
| 消化系統(tǒng)模型 | 細胞培養(yǎng) | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通細胞株 | HE染色 |
| 膿毒癥模型 | 細胞缺氧培養(yǎng) | 油紅O染色 |
| 胃潰瘍模型 | 細胞培養(yǎng)+支架 | 番紅固綠染色 |
| 胰腺炎模型 | 干細胞培養(yǎng) | Masson染色 |
| 肝纖維化模型 | 原代細胞分離/提取/培養(yǎng) | 天狼猩紅染色 |
| DIO肥胖模型 | 細胞轉(zhuǎn)染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 膽結(jié)石模型 | Trans well共培養(yǎng) | 阿利新藍染色 |
| 結(jié)腸炎(UC)模型 | 細胞增殖 | 甲苯胺藍染色 |
| 脂肪肝模型 | 細胞計數(shù) | 尼氏染色 |
| 急性肝損傷模型 | 生長曲線測定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代謝系統(tǒng)疾病模型 | 存活曲線測定 | 普魯士藍染色 |
| 骨質(zhì)疏松模型 | ccK-8增殖檢測 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖檢測 | EVG染色 |
| 高尿酸血癥模型 | CFSE檢測增殖-流式檢測 | VonKossa染色 |
| 呼吸系統(tǒng)模型 | BrDU檢測-免疫熒光法 | 剛果紅染色 |
| 肺纖維化模型 | 細胞凋亡 | 蘇丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式檢測細胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺損傷模型 | WB檢測凋亡相關蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射電鏡觀察凋亡小體 | 革蘭氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB顯色) | AB-PAS染色 |
| 支氣管炎模型 | Tunel(熒光法,含試劑盒) | 亞甲基藍染色 |
| 泌尿生殖系統(tǒng)模型 | DNA ladder法 | 苯胺藍染色 |
| 慢性腎衰模型 | 細胞周期 | 熒光 DAPI染色 |
| 急性腎衰模型 | 細胞顯微計數(shù) | 普魯士藍染色 |
| 腎間質(zhì)纖維化模型 | PI染色 | 間苯二酚堿性品紅染色 |
| 腎結(jié)石模型 | BrdU滲入法 | 銀染 |
| 腎炎模型 | 免疫熒光染色 | 黑色素染色 |
| 子宮內(nèi)膜異位癥模型 | PI流式檢測細胞周期 | 鍍銀染色 |
| 心血管系統(tǒng)模型 | 細胞運動 | PASM 六胺銀染色 |
| 冠心病模型 | Transwell檢測細胞遷移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell檢測細胞侵襲 | 富爾根染色 |
| 心臟驟停模型 | 細胞劃痕 | 亞甲基藍染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 細胞克隆 | 碘-碘化鉀染色 |
| 動脈粥樣硬化模型 | 集落形成法/稀釋鋪板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 軟瓊脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血壓模型 | 毛細管克隆法 | 改良苯酚品紅染色 |
| 神經(jīng)系統(tǒng)模型 | 體外實驗血管生成 | 網(wǎng)狀纖維染色 |
| 腦卒中模型 | 磁珠分選細胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
| 栓塞性腦梗死模型 | 流式分選細胞 | 鍍銀染色 |
| 腦出血模型 | 開機費 | movat五色染色 |
| 腦損傷模型 | 單色 | 維多利亞藍染色 |
| 脊髓損傷模型 | 雙色 | 免疫組化 |
| 帕金森模型 | CBA多細胞因子流式檢測 | 免疫組化預式 |
| 老年癡呆模型 | 組織/血液細胞制備 | 免疫組化正式 |
| 應激模型 | 組織單細胞制備 | 免疫熒光（石蠟-單標） |
| 骨骼疾病模型 | 中性粒細胞提取 | 免疫熒光（石蠟-雙標） |
| 骨折模型 | 其他樣本細胞制備（如血液等） | 免疫熒光（石蠟-三標） |
| 骨缺損模型 | 外周血PBMC分離 | 免疫熒光（冰凍-單標） |
| 風濕免疫性關節(jié)炎模型 | 線粒體組學 | 免疫熒光（冰凍-雙標） |
| 骨關節(jié)炎模型 | 線粒體膜電位檢測-流式法 | 制片前處理 |
| 五官疾病模型 | 線粒體膜電位檢測-免疫熒光法 | 石蠟組織包埋 |
| 眼科疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--流式 | 特殊包埋（細胞、材料、眼球等） |
| 鼻腔疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--免疫熒光 | 軟化（肝硬化、皮膚結(jié)痂、植物等） |
| 皮膚疾病模型 | 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP） | 骨組織脫鈣（小） |
| 皮膚損傷模型 | 溶酶體免疫熒光法 | 骨組織脫鈣（大） |
| 腫瘤疾病模型 | 線粒體+溶酶體共定位 | 骨組織EDTA脫鈣（小） |
| 原位瘤模型 | 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) | 骨組織EDTA脫鈣（大） |
| 轉(zhuǎn)移瘤模型 | 線粒體鈣瞬時變化檢測-流式 | 石蠟白片 |
| 皮下植瘤模型 | ATP檢測 | 細胞爬片 |
| ADP檢測 | ||
| AMP檢測 | ||
| 流式 | DNA/RNA半定量檢測 | 基因編輯工具 |
| 組織細胞懸液處理 | pcr檢測mRNA | 合成（3保1）片段/質(zhì)粒/引物合成 |
| 細胞處理 | microRNA檢測 | 質(zhì)粒載體構(gòu)建 |
| 血液標本處理 | LncRNA表達量的檢測 | 過表達腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 細胞刺激培養(yǎng) | CirRNA表達量的檢測 | shRNA腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 單色檢測 | 凝膠電泳 | 過表達慢病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 雙色檢測 | 基因合成 | shRNA慢病毒載體構(gòu)建包裝 |
| Annexin V/PI凋亡 | ＜300 | 過表達腺相關病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 細胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 1500 - 5000 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株 | |
| >5000 | ||
| 特殊序列 | ||
| ELISA | WB | qPCR |
| 組織勻漿處理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
| ELISA（不含試劑盒）48T/kit | WB檢測一（10孔膜/指標） | mRNA引物設計及合成 |
| ELISA（不含試劑盒）96T/kit | 灰度值分析及作圖一（10孔膜/指標） | miRNA引物設計及合成 |
| ELISA（含國產(chǎn)試劑盒）48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物設計及合成 |
| ELISA（含國產(chǎn)試劑盒）96T/kit | WB檢測二（10孔膜/指標） | CircRNA引物設計及合成 |
| 灰度值分析及作圖二（10孔膜/指標） | mRNA RT-qPCR | |
| miRNA RT-qPCR | ||
| LncRNA RT-qPCR | ||
| CircRNA RT-qPCR |
收費標準/服務周期/提供結(jié)果：
歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。
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